Мікробіологічні характеристики біоценозу анаеробного мулу і послідовність біохімічних процесів
Мікробіологічна характеристика анаеробного мулу детально приведена в роботах [211-231].
Хоча в бродячому осаді метантенків, окрім бактерій, виявляються найпростіші мікроорганізми та гриби, вважається, що вони потрапляють туди разом з активним мулом або біоплівкою, але істотної ролі в процесах бродіння не відіграють.
Загальна кількість облігатних анаеробів у анаеробному мулі на
1.. 3 порядки перевищує сумарну чисельність факультативних анаеробів і аеробів. Тому вважається, що в основному процес зброджування здійснюється анаеробними формами бактерій.
Бактеріальну мікрофлору анаеробного мулу умовно можна поділити на дві групи. Першу складають бактерії, що використовують у конструктивному й енергетичному метаболізмі органічної речовини вихідного субстрату (кислотоутворюючі бактерії, основними кінцевими продуктами життєдіяльності яких є жирні кислоти). До другої групи входять специфічні види бактерій, спроможних перетворювати метаболіти киелотоутворюючих бактерій на кінцеві продукти метанового бродіння — метан і двооксид вуглецю (метаноутворюючі або метаногенні бактерії).
Кислотоутворюючі бактерії представлені облігатними та факультативними анаеробами. З бродячого осаду різними дослідниками виділено від 50 до 92 видів бактерій [3], з яких близько половини складають спороутворюючі форми. До основних належать бактерії родів Clostridium, Bacillus, Pseudomonas, Micrococcus, Bacteroides, Escherichia. Різноманітності видів відповідає різноманітність фізіологічних особливостей кислотоутворюючих бактерій. Складний хімічний склад осадів обумовлює розвиток у метантенку різних фізіологічних груп бактерій, що піддають компоненти осадів окислювально-відновним перетворенням. Органічні речовини розкладаються амоніфікуюними, целюлозними, жиророзщеплювальними, крахмалоокислючими й іншими бактеріями. У анаеробному мулі знайдені денітрифікатори та сульфатредуцируючі бактерії. Серед цих основних фізіологічних груп виявлені види, яки споживають як джерела вуглецю абсолютно певні речовини. Передбачають, що макромолекули білків, жирів і вуглеводів руйнуються в основному спороутворюючими бактеріями родів Clostridium (облігат- ні анаероби) і Bacillus (факультативні анаероби). Абсолютно очевидно, що значну видову різноманітність біоценозу анаеробного мулу забезпечує його стійкість і спроможність трансформувати складний комплекс сполук різних класів, що знаходяться в осадах стічних вод. Завдяки значній видовій різноманітності та взаємному впливу видів один на одного група кислотоутворюючих бактерій в цілому може здійснювати процес бродіння складних субстратів у досить широкому діапазоні значень pH та окислювально-відновного потенціалу. І’етероорганотрофні бактерії цієї групи рясно представлені в осадах стічних вод і спроможні до швидкого розмноження в процесі зброджування.
Метанутворюючі бактерії виділені в окреме сімейство Methano-bacteriaceae, що включає три роди: Methanobacterium, Methanococcus, Methanosarcina. Род Methanobacterium включає види, що мають форму прямих або зігнутих паличок довжиною 3.. .7 мкм, часто утворюючих нитки. Представники роду Methanococcus мають сферичні клітини розміром 0,5… 10 мкм, інколи неправильної форми. Нерухомі бактерії роду Methanosarcina утворюють правильні пакети, що складаються з крупних сферичних клітин розмі
ром 1,5…2,5 мкм. Окрім приведених у довіднику Бергу родів мета — ноутворюючих бактерій [3], в літературі є відомості про виділення та вивчення ще декількох видів різної морфології, віднесених до родів Methanomicrobium, Methanobacillus, Methanobrevibacter, Methanogenium, Methanospirillum, Methanothrix [3]. Таким чином, хоча види метанутворюючих бактерій не багаточисельні, але морфологічно вони досить різноманітні. Всі метаногенні бактерії — об — лігатні анаероби, дуже чутливі до окислювально-відновних умов та активної реакції середовища. Оптимальне значення pH для них обмежене вузьким інтервалом 6,8…7,5, а оптимум окислювально — відновного потенціалу складає від -510 до -590 мВ. Метанотвірні бактерії чутливі до будь-яких окислювачів: навіть за присутності нітратів і сульфатів синтез метану затримується. При цьому слід підкреслити, що в енергетичних реакціях метанутворючи бактерії використовують лише відносно прості сполуки: нижчі жирні кислоти та відповідні спирти. Нездатність метаногенних бактерій до зброджування складних субстратів обумовлює розвиток їх в екосистемах лише у співтоваристві з гетеротрофними мікроорганізмами. Анаеробні гетеротрофні мікроорганізми забезпечують метанутворючи бактерії необхідним субстратом, створюючи при цьому сприятливі окислювально-відновні умови. Слід зазначити, що вивчення метанутворючих бактерій вельми складно у зв’язку з високою чутливістю їх до кисню, повільним розвитком і розмноженням. Внаслідок цього багато питань, пов’язаних з фізіологією метаногенних бактерій, в даний час до кінця не з’ясовано.
Закономірності біохімічного окислення речовин в анаеробних умовах, послідовність біохімічних перетворень складних органічних субстратів розглядається як двохстадійний процес, що включає кислотоутворення та метанутворення.
Завдяки різноманітності фізіологічних груп і метабіотичним взаєминам між окремими видами кислотоутворюючих бактерій біохімічної деструкції піддаються всі органічні компоненти відходів. Схема біохімічних процесів бродіння осадів на стадії кислотоутворення включає значну кількість можливих шляхів деструкції органічних речовин, утворюючих основні кінцеві продукти розкладання білків, жирів і вуглеводів на першій стадії бродіння. В результаті співтовариство кислотоутворюючих бактерій перетворює білкові сполуки, жири та вуглеводи відходів на нижчі жирні кислоти, спирти, аміак, водень і сірководень. Більше 70 % жирних кислот припадає на частку оцтової кислоти, приблизно 25 % складають пропіо — нова та масляна кислоти. Окрім того, в процесі кислого бродіння в незначних кількостях утворюється мурашина, валеріанова та капронова кислоти.
Метаболізм специфічних меганутворюючих бактерій вивчався в основному у напрямі дослідження механізму утворення метану. При ферментації оцтової кислоти та метилового спирту метан синтезується як результат відновлення метальної ірупи
Е„
СН3СООН -» СН4 + С02, (2.6)
Ер
4СН3СООН-> ЗСН, + С02 + 2Н?0, (2.7)
де Е„ — теплова енергія.
Інший механізм утворення метану характерний для тих видів метаногенних бактерій, які не спроможні утилізувати оцтову кислоту та метанол. Такі бактерії синтезують метан у результаті відновлення двооксиду вуглецю за реакцією:
4Н2 + С02 => СН4 + 2Н20. (2.8)
За даними ряду досліджень у різноманітному за складом біоценозі до процесу метаноутворення залучаються і складніші речовини, такі, як масляна, пропіонова, капронова, валеріанова кислоти і відповідні спирти. Перетворення їх здійснюються за типом реакції (2.8), в якій замість молекулярного водню беруть участь перераховані органічні субстрати — донори електронів.
Таким чином, всі відомі шляхи одержання метану зводяться до реакцій двох типів: відновлення метальної групи оцтової кислоти та метанолу й відновлення двооксиду вуглецю, що виконує роль кінцевого акцептора водню.
Вважається, що близько 70 % метану утворюється в результаті реакцій (2.6) і (2.7), останні ЗО % — в ході відновлення двооксиду вуглецю [3J.
Впродовж довгого часу для опису анаеробного процесу використовувалася спрощена модель, згідно якої складні молекули розкладаються до простих (в основному, летких жирних кислот) кис — лотоутворюючими бактеріями, а ці проміжні сполуки розкладаються до метану та двооксиду вуглецю метаноутворюючими бактеріями. Проте, як було показано вище, біохімія цього процесу тепер представляється складнішою.
Термодинаміка та кінетика анаеробного процесу детально ще не вивчені, проте можливий простий узагальнений аналіз, заснований на звичайній теорії реакторів [1.3, 16, 24, 38, 47, 63, 71, 76, 98, 139].
Для даного субстрату, що розкладається мікроорганізмами, швидкість зміни концентрації субстрату С за часом складає:
(2 9)
х — коефіцієнт кількості субстрату в реакторі, д. о.;
Кс — концентрація субстрату, при якій швидкість реакції складає половину від максимальної,
С — концентрації субстрату.
Питома швидкість росту мікроорганізмів щ,, знаходиться з рівняння:
(2.10)
де Y — коефіцієнт виходу (кількість біомаси, що утворилася на кг спожитого субстрату).
Отже
(211)
Цей спрощений підхід, очевидно, не настільки дієвий при застосуванні його до змішаних мікробних культур, що мають місце у
всіх системах очищення стічних вод. Для такої системи із складними внутрішніми взаємозв’язками, як змішана анаеробна культура, ці проблеми з’єднуються із складнощами у визначенні активної біомаси та недоліком знань про процеси виробництва і вживання різних субстратів. Лімітуючою стадією в схемі біодеградації є, на наш погляд, конверсія ацетату в метан. Для обчислення часу перебування, необхідного для ефективної біодеірадації мулу, потрібні дані для розрахунку за рівнянням (2.11).
Вік мулу, або середній час перебування клітин Тк, може бути обчислений за рівнянням:
^ = (2.12) ч
де Кр — константа розкладу біомаси, що характеризує процес її відмирання, добГ1;
ц — питома швидкість росту мікроорганізмів, доб.’1;
Тк — вік мулу, або середній час перебування клітин, доба.
Наближені значення величин в рівняннях (2.10)-(2.11), за літературними даними, складають:
Y = 0,045; Кр = 0,02 доб. р™ = 8,7 добГ1; Кс=165г/л.
Отже, вік мулу, або середній час перебування клітин становить:
Для низьких концентрацій ацетату, які можуть зустрічатися в звичайних комунальних метантенках, значення Кс и С, близькі, і, отже, Тк складатиме приблизно 0,5 діб. Для систем з високою концентрацією ацетату (> 200 мг/л) значення Тк знижуються до 0,25 доби. Проте за присутності органічних сполук, які з великими труднощами піддаються біодеградації, наприклад жирних кислот з довгим ланцюгом, для яких Кс складає понад 2000 мг/л, Тк може досягати 0,5 діб. Значна частина летючих кислот у неперевантажених реакторах має невелику молекулярну масу, що забезпечує значення Тк не більше 0,5 діб.
Отже, для звичайних реакторів з мішалкою в умовах відсутності якого-небудь утримування біомаси або рециркуляції мінімальний час перебування рідини в апараті складає 0,5 доби. У інших системах можна зменшити час перебування рідини за рахунок збільшення часу перебування біомаси понад 0,5 доби.
Моделі анаеробних систем можуть бути використані для прогнозування швидкості утилізації субстрату, приросту біомаси та утворення кінцевих продуктів, а також для проектування й оптимі — зації очисних систем.
Загальний час перебування осаду, необхідний для анаеробного метаногенезу, визначається із загальних кінетичних рівнянь. Для визначення ж швидкостей окремих проміжних реакцій потрібні складніші моделі.
Введення коефіцієнта виходу Y до рівняння (2.9) дозволяє перетворити його на рівняння швидкості зростання біомаси
Це рівняння може бути надалі уточнене введенням коефіцієнта, що враховує енергію, яка використовується самими бактеріями, коефіцієнта розпаду, що враховує відмирання бактерій, або коефіцієнта підтримки.
У будь-якому разі до рівняння (2.14) вводиться додаткова зіс- тавна Ь, яка враховує ендогенне дихання
де b — додаткова зіставна, доб-1. Отже
У стаціонарному стані
Субстрат |
t, °С |
Y, кг/кг |
Рш, доб. 1 |
Кс, мг/л |
Ь, доб. 1 |
Оцтова кислота |
35 |
0,04 |
8,1 |
154 |
0,019 |
ЗО |
0,054 |
4,8 |
333 |
0,037 |
|
25 |
0,05 |
4,7 |
869 |
0,011 |
|
Пропіонова кислота |
35 |
0,042 |
9,6 |
32 |
0.010 |
25 |
0,051 |
9,8 |
613 |
0,040 |
|
Вищі жирні кислоти |
35 |
0,047 |
15,6 |
5 |
0,027 |
35 |
0,12 |
3,67 |
680 |
0,015 |
|
25 |
0,12 |
4,65 |
1270 |
0.015 |
|
Глюкоза |
20 |
0,12 |
3,85 |
1580 |
0,015 |
де Т — номінальний час перебування рідини в реакторі або середній час перебування клітин в проточному реакторі з мішалкою, доб.-1. У табл. 2.4 приводяться значення кінетичних констант, визначених в стаціонарному стані. |
Таблиця 1.4 — Значення кінетичних констант |
Не дивлячись на обмеження в точності визначення кінетичних параметрів, їх можна використовувати при проведенні розрахунків.
Прості рівняння типу (2.9)-(2.11) працюють незадовільно для великомасштабних зброджувачів через інгібірування за типом зворотного зв’язку та нестаціонарних умов [3] .
Математичний опис інгібірування ферменту субстратом визначається шляхом перетворення рівняння (2.9) до виду
де Кі — константа інгібірування.