Выкармливание штамма на 2Н2О-содержащих средах
Выкармливание штамма на 2Н2О-содержащих средах
Для выкармливания штамма был избран ступенчато-увеличивающийся градиент концентрации 2H2О в ростовых средах в присутствии 2 об.% [U -2H] MetOH, потому что предпологалось, что постепенное привыкание клеточки к 2Н2О будет оказывать подходящий эффект на характеристики роста и общее самочувствие культуры (таблица). Для компенсации ауксотрофности по лейцину эту аминокислоту добавляли в ростовую среду в протонированном виде в концентрации 10 мг/л.
Поначалу начальный штамм выращивали на 2Н2О-содержащих средах без его подготовительной адаптации к 2Н2О, для того чтоб найти его ростовые и биосинтетические характеристики на этих средах. При росте начального штамма на контрольной среде с обыкновенной водой длительность лаг-фазы и время клеточной генерации составили 20 и 2.2 ч соответственно (таблица, опыт 1).
В промежных опытах эти характеристики изменялись пропорционально концентрации 2Н2О. А именно, длительность лаг-фазы и время клеточной генерации увеличивались, а рост и уровень скопления фенилаланина уменьшались, при этом самые низкие значения были зафиксированы на очень дейтерированной среде с 98 об.% 2Н2О. Так, в опыте (5), таблица, выход микробной биомассы был снижен в 3.3, а уровень скопления фенилаланина в ростовой среде в 2.7 раз по сопоставлению с контролем, потому было нужно проводить адаптацию штамма к 2Н2О.
Таблица. Изотопный состав ростовых сред и характеристики бактериального роста начального штамма
Составляющие среды, об.%
H2O 2H2O MetOH [U -2H]
MetOH
лаг-фаза
(ч)
Выход биомассы((%)
Время генерации
(ч)
Наибольший уровень скопления фенилаланина в ростовой среде
(%)
(1)
98
0
2
0
20
100.0
2.2
100.0
(2)
73.5
24.5
0
2
34
85.9
2.6
97.1
(3)
49.0
49.0
0
2
44
60.5
3.2
98.8
(4)
24.5
73.5
0
2
49
47.2
3.8
87.6
(5)
0
98.0
0
2
60
30.1
4.9
37.0